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Acta Bioquimica Clinica Latinoamericana

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Open Access journal
ISSN (Online) 0325-2957
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Ascaris lumbricoides action on the erythrocyte and desyalated erythrocyte anionic charge
- Abstract: El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de A. lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados. Se trabajó con 30 extractos ([EA]) y 2 concentrados larvales parasitarios ([CLAL] 1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) y eritrocitos Grupo "O" en medio salino (GR) y enzimático (GRb). Se incubó el sedimento globular con igual volumen de parásito y el Control (GRc) con solución fisiológica, a 37 ºC. Se aplicaron los Métodos de Polibrene y Azul Alcian y se implementó una Titulación de la Agregación a partir del Polibrene. Se definieron coeficientes para cada método que fueron analizados estadísticamente. Los resultados mostraron que a mayor tiempo de tratamiento y a mayor concentración larvaria, aumentó la captación de ácido siálico (AS) disminuyendo la agregación de GR y GRb. El efecto fue mayor en la incubación del parásito con GRb en relación de GR. El tratamiento enzimático redujo la carga porcentual en los glóbulos incubados con ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% de la inicial) y la Diferencia de Carga de GR y GRb debida a ambos fue aproximadamente del 10% indicando que la pérdida de carga producida por [CLAL]1 fue significativa con respecto a [CLAL]2. Se concluye que A. lumbricoides puede captar AS eritrocitario. Este fenómeno contribuiría a explicar la anemia y trombos producidos en ascariosis, destacando que en pacientes con patologías que cursen con déficit de AS estas complicaciones serían más relevantes.The aim of this work was to study the A. lumbricoides' effect on the anionic charge of erythrocytes and desyalated erythrocytes. Work was carried out on 30 extracts ([AE]) and 2 larval concentrates ([ALLC] 1: 500-600; ([ALLC] 2: 200-300 larvae/ mL) of the parasite and Group O erythrocytes in saline (RC) and enzymatic medium (RCb). The red cell sediment was incubated with an equal volume of parasite and the Control (RCc) with saline solution, at 37C. Polybrene and Alcian Blue Methods were applied and Aggregation Titulation from Polybrene was implemented. The coefficients for each method were defined,which were analyzed statistically. The results showed that a longer treatment and also at higher larval concentration,increased the capture of sialic acid (AS),while decreasing the RC and RCb aggregation. The effect was greater on the incubation of the parasite with RCb in relation to RC. The enzymatic treatment reduced similarly the percentage charge in the globules incubated with both [ALLC] (16% -17% of initial) and the variation of RC and RCb charge due to both was about 10%,indicating that the charge loss caused by [ALLC]1 was significant with regard to [ALLC]2. We concluded that A. lumbricoides can capture erythroctyte SA. This phenomenon would contribute to explain the anaemia and thrombi produced in ascariosis,noting that in patients with AS deficit pathologies,these complications would be more relevant.O objetivo foi estudar o efeito de A. lumbricoides sobre a carga aniônica de eritrócitos e eritrócitos desializados. Trabalhou-se com 30 extratos ([EA]) e 2 concentrados larvais parasitários ([CLAL]1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) e eritrócitos Grupo "O" em meio salino (GV) e enzimático (GVb). Foi incubado o sedimento globular com igual volume de parasita e o Testemunha (GVc) com solução fisiológica,a 37ºC. Foram aplicados os Métodos de Polybrene e Azul Alciano e se implementou uma Titulação da Agregação a partir do Polybrene. Definiram-se coeficientes para cada método que foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram que a maior tempo de tratamento e a maior concentração larvária,aumentou a captação de ácido siálico (AS) diminuindo a agregação de GV e GVb. O efeito foi maior na incubação da parasita com GVb em relação de GV. O tratamento enzimático reduziu a carga percentual nos glóbulos incubados com ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% da inicial) e a Diferença de Carga de GV e GVb devida a ambos foi aproximadamente de 10% indicando que a perda de carga produzida por [CLAL]1 foi significativa com relação a [CLAL]2. A conclusão é que A. lumbricoides pode captar AS eritrocitário. Este fenômeno contribuiria a explicar a anemia e trombos produzidos em ascaridíase,destacando que em pacientes com patologias que cursem com déficit de AS estas complicações seriam mais relevantes.
Study of the ability of two swab transport systems to maintain viability of clinically important bacteria
- Abstract: Se compararon dos dispositivos de conservación de muestras tomadas por hisopado con cepas de referencia de Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae y Streptococcus pneumoniae (ambos con medio de Stuart). El dispositivo Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Italia) resultó ser significativamente más efectivo que el Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, España) probablemente porque la estrangulación que presenta al comienzo de la columna semisólida (sistema tipo Venturi) permitiría una mejor conservación de los microorganismos.Two extendedly-used swab transport devices with Stuart medium using Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae and Streptococcus pneumoniae reference strains, were compared. Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Italy) was significantly more effective than Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, Spain), probably because the narrowing of the tube, just at the beginning of the semisolid column (Venturi system), would yield a better conservation of diffrerent organisms.Foram comparados dois dispositivos de conservação de amostras tomadas por swab com cepas de referência de Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae e Streptococcus pneumoniae (ambos com meio de Stuart). O dispositivo Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Itália) resultou ser significativamente mais efetivo que o Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, Espanha) provavelmente porque o estrangulamento que apresenta no início da coluna semi-sólida (sistema tipo Venturi) permitiria uma melhor conservação dos microorganismos.
Effects of casein or soy hydrolysates on glucose metabolism in rats
- Abstract: El efecto de hidrolizados de caseína o soja sobre el metabolismo glucídico fue estudiado en ratas. Se determinaron las variaciones de la glicemia, insulinemia y aminoácidos plasmáticos después de alimentación por sonda con diferentes péptidos obtenidos por proteólisis de caseína o soja. Los productos de digestión fueron separados combinando diálisis, cromatografía de intercambio iónico y ultrafiltración. Dos proteínas enteras, tres fracciones peptídicas de cada proteína y dos mezclas de L-aminoácidos simulando la composición de la proteína entera fueron suministradas a las ratas mediante sonda nasogástrica (gavage). Las fracciones del hidrolizado de caseína produjeron niveles de insulinemia más elevados que las de la soja, con excepción de los péptidos con masa molecular entre 10 y 1 kDa. No se encontraron diferencias significativas (p
Iron liver quantification using electrothermal atomic absorption spectrometry
- Abstract: Se estudió el depósito de hierro (Fe) en tejido hepático de individuos sanos y de individuos con enfermedades crónicas del hígado, siendo todos adultos entre 46 y 70 años. La cuantificación de hierro se realizó mediante la técnica de Espectrometría de Absorción Atómica con Vaporización Electrotérmica (ET AAS). Las muestras de hígado obtenidas por biopsia hepática fueron pesadas y sometidas a digestión ácida. Simultáneamente se realizaron ensayos de recuperación del analito fortificando las muestras y el blanco de reactivo con el agregado de un estándar de Fe. La cuantificación se realizó mediante una curva de calibración (con estándares entre 10 y 50 µg/L). Se midieron áreas de pico a 248,3 nm usando como fuente una lámpara de cátodo hueco. Los resultados obtenidos de las muestras correspondientes a individuos sanos fueron inferiores a 1.000 µg/g de tejido seco, mientras que los valores correspondientes a individuos con enfermedades crónicas del hígado resultaron superiores, entre 1.800 y 7.835 µg/g de tejido seco. Se observó una relación directa entre la concentración de hierro en tejido hepático y el grado de depósito de este metal, por lo que el desarrollo de la metodología ET AAS permitió cuantificar la sobrecarga de hierro y estimar los valores obtenidos asociados a diferentes hepatopatías.The iron (Fe) deposit was studied in the liver tissue of healthy and chronic liver disease subjects, all of them adults aged 46 to 70. The iron quantification was made by electrothermal atomic absorption spectrometry (ET AAS). Biopsy liver samples were weighed, measured, and put under acid digestion. Simultaneously a test was performed to analyze recovery in both strong samples and bound reagents with the addition of a standard of iron. Quantification was carried out using a calibration curve (from 10 to 50 mg/L): Peak areas of 248.3 nm were measured through a hollow cathode lamp. The results of the samples for healthy individuals were less than 1,000 µg/g of dry tissue, while the range in subjects with chronic liver disease was higher, (range from 800 to 7,835 µg/g dry tissue). There is a direct relationship between concentrations of iron in liver tissue and the range of the metal deposit for which reason development of the ET AAS methodology made it possible to quantify the iron overload and estimate the values associated to the different hepatopathies.Foi estudado o depósito de ferro (Fe) em tecido hepático de indivíduos saudáveis e de indivíduos com doenças crônicas do fígado, sendo todos adultos entre 46 e 70 anos. A quantificação de ferro foi realizada através da Técnica de Espectrometria de Absorção Atômica com Vaporização Eletrotérmica (ET AAS). As amostras de fígado obtidas por biópsia hepática foram pesadas e submetidas à digestão ácida. Simultaneamente foram realizados testes de recuperação do analito fortificando as amostras e o branco de reagente com o acréscimo de um padrão de Fe. A quantificação foi realizada através de uma curva de calibragem (com padrões entre 10 e 50 mg/L). Mediram-se áreas de pico a 248,3 nm usando como fonte uma lâmpada de cátodo oco. Os resultados obtidos das amostras correspondentes a indivíduos sadios foram inferiores a 1.000 µg/g de tecido seco, e os valores correspondentes a indivíduos com doenças crônicas do fígado resultaram superiores, entre 1.800 a 7.835 µg/g de tecido seco. Foi observada uma relação direta entre a concentração de ferro em tecido hepático com o grau de depósito deste metal, pelo qual o desenvolvimento da metodologia ET AAS permitiu quantificar a sobrecarga de ferro e calcular os valores obtidos associados a diferentes hepatopatias.
Biochemical and hematological parameters and productivity of rabbits fed low and normo-protein diets
- Abstract: El objetivo del presente trabajo fue realizar un modelo experimental con la finalidad de evaluar la bioquímica sanguínea, hematología e índices de productividad de conejos alimentados con dietas normo e hipoproteica. Los conejos (n= 24), con distintos grados de cruzamiento entre raza Californiana y Neocelandesa, destetados, edades (rango) de 30-34 días, pesos corporales (rango) de 730-770 g fueron separados aleatoriamente en dos grupos (NP y HP). El grupo NP fue alimentado con balanceado comercial (17% PB) y el HP con un alimento formulado con cereales y algunos de sus subproductos, de manera que su porcentaje de proteína bruta (PB) fuera de 12,2%. A los animales se los pesó semanalmente, se estimó el consumo semanal de alimento y se recolectaron muestras sanguíneas cada 14 días durante 8 semanas. Los índices productivos (crecimiento, rendimiento, conformación, despiece de la canal) fueron diferentes entre los animales de las dieta NP vs. HP (p < 0.05). El contenido de urea en plasma fue el parámetro bioquímico que permitió relacionar la alimentación normo e hipoproteica y la producción. En conclusión, los resultados obtenidos mostraron que el nivel de proteínas en la dieta de conejos produce modificaciones en sus índices de productividad.The objective of this work was to study growth, yield, conformation, carcass cutting and representative biochemical and hematological parameters of protein metabolism in an experimental model in rabbits fed on low-protein and normal protein diets. Rabbits (n= 24), with varying degrees of cross between California and New Zealand breeds, weaned at 30-34 days (range), with 730-770 g body weight (range) were randomly separated into two groups (NP and HP). HPs were fed on a diet of grain and some of their by-products so that their percentage of crude protein (CP) was 12.2%. NPs were fed commercial feed (17% CP). The animals were weighed weekly, weekly food consumption was estimated, and blood samples were collected every 14 days until the end of the trials (8 weeks). Productive parameters (growth, yield, conformation, cutting of the carcass) were significantly different between NP vs HP animals (p < 0.05). Urea content in plasma was the biochemical parameter that made it possible to relate hypoproteic and normal diet and production. The results confirm that the level of protein in rabbit diet causes changes in their productivity.O objetivo do presente trabalho foi realizar um modelo experimental com a finalidade de avaliar a bioquímica sanguínea, hematologia e índices de produtividade de coelhos alimentados com dietas normoproteica e hipoproteica. Os coelhos (n= 24), com diversos graus de cruzamento entre raça Californiana e Neozelandesa, desmamados, idades (faixa) de 30-34 dias, pesos corporais (faixa) de 730-770 g foram separados aleatoriamente em dois grupos (NP e HP). O grupo NP foi alimentado com balanceado comercial (17% PB) e o HP com um alimento formulado com cereais e alguns de seus subprodutos, de maneira que seu percentual de proteína bruta (PB) fosse de 12,2%. Os animais foram pesados semanalmente, estimou-se o consumo semanal de alimento e foram coletadas amostras sanguíneas a cada 14 dias durante 8 semanas. Os índices produtivos (crescimento, rendimento, conformação, separação da carcaça em partes) foram diferentes entre os animais das dietas NP vs. HP (p < 0.05). O conteúdo de ureia em plasma foi o parâmetro bioquímico que permitiu relacionar a alimentação normoproteica e hipoproteica e a produção. Em conclusão, os resultados obtidos mostraram que o nível de proteínas na dieta de coelhos produz modificações em seus índices de produtividade.
Impact of creatinine measurement on glomerular filtration rate estimation
- Abstract: Con el objeto de detectar precozmente la enfermedad renal crónica, muchas sociedades científicas han recomendado incorporar a los informes de laboratorio la velocidad de filtración glomerular (VFG) estimada por fórmulas asociadas a creatinina plasmática (Cr) como marcador de función renal. Frente a la variedad de metodologías disponibles en Argentina, los bioquímicos se encuentran frente al dilema de la elección del método a utilizar para cuantificar Cr. El objetivo de este trabajo es analizar si la VFG estimada por fórmulas a partir de Cr dosadas por diferentes métodos son comparables. Si bien no se observaron diferencias estadísticamente significativas entre las Cr cuantificadas por los métodos Jaffé cinético (JC), Jaffé cinético con compensación (JCCC) y enzimático (ENZ), no se obtuvo una correlación adecuada entre los mismos. Se observó que el método de Jaffé cinético sin compensación arrojó resultados de creatinina sérica, que al trasladarse a ecuaciones que determinan la VFG, dejaron un margen de error inaceptable (circunstancia que no se observó de igual forma en el JCCC). Se concluye que la VFG estimada por fórmulas a partir de Cr dosadas por los métodos JC y JCCC, tomando como referencia el método enzimático, no son comparables.In order to do early detection of chronic renal disease, many scientific societies have recommended to report a GFR estimate usinga prediction equation associated with serum creatinine measurement, as a marker of renal function. Faced with the wide variety of available creatinine measurement, as a marker of renal function. Faced with the wide variety of available creatinine methodologies in this country, professionals have a dilemma: the choice of which method must be used to quantify creatinine. The purpose of this study is to analyze whether the estimates of GFR usingcreatinine measures by different methods are comparable. Although no statistically significant differences between Cr quantified by Kinetic Jaffe method (JC), compensated kinetic Jaffe (JCCC) and enzymatic (ENZ) were observed, no good correlation was obtained between them. It was observed that the kinetic Jaffe method without compensation showed results that, beingincorporated in equations that determine the GFR, left an unacceptable margin of error (a circumstance that was not observed in the JCCC). Conclusion: GFRestimated with formulas usingcreatinine measured by JC and JCCC compared to ENZ are not comparable.Visando detectar precocemente a doençã renal crônica, muitas sociedades científicas têm recomendado incorporar aos relatórios de laboratório a velocidade de filtração glomerular (VFG) estimada por fórmulas associadas a creatinina plasmática (Cr) como marcador de função renal. Frente à variedade de metodologias disponíveis na Argentina, os bioquímicos se encontram frente ao dilema da seleção do método a utilizar para quantificar Cr. O objetivo deste trabalho é analisar se a VFGestimada por fórmulas a partir de Cr dosadas por diferentes métodos são comparáveis. Embora não se observassem diferenças estatisticamente significativas entre as Cr quantificadas pelos métodos Jaffé cinético (JC), Jaffé cinético com compensação (JCCC) e enzimático (ENZ), não foi obtida uma correlação adequada entre os mesmos. Observouse que o método de Jaffe cinético sem compensação deuresultados de creatinina sérica, que ao se trasladarem para equações que determinam a VFG, deixaram uma margem de erro inaceitável (circunstância que não se observoude igual forma no JCCC). Conclusão: a VFGestimada por fórmulas a partir de Cr dosadas pelos métodos JC e JCCC, tomando como referência o método enzimático, não são comparáveis.
Use of tandem mass spectrometry for the newborn screening of inborn errors of metabolism
- Abstract: La aplicación de la espectrometría de masas en tandem en el diagnóstico de los errores innatos del metabolismo ofrece la posibilidad de ampliar el número de enfermedades que son tamizadas durante el periodo neonatal. Esta tecnología permite detectar, con gran sensibilidad, especificidad y rapidez, más de 30 enfermedades metabólicas en un mismo ensayo a partir de un único disco de sangre seca sobre papel de filtro. Para esto se realiza el análisis combinado del perfil de aminoácidos y acilcarnitinas sin requerir, generalmente, de sistemas de cromatografía adicionales. El procesamiento analítico que actualmente se utiliza en los diferentes laboratorios de tamiz es relativamente homogéneo.The use of tandem mass spectrometry in the diagnosis of inborn errors of metabolism has the potential to expand newborn screening programmes to include many different diseases. This technique can quickly detect, with great specificity and sensibility, more than 30 diseases using the same punch of dried blood in filter paper through the combined analysis of acylcarnitines and amino acid mass spectra profile. The detection of a particular disease this way could be made without the need of a chromatographic system. The analytical analyses in current use by different screening laboratories are very similar.A aplicação da espectrometria de massas em tandem no diagnóstico dos erros inatos do metabolismo oferece a possibilidade de ampliar os programas de screening neonatal para incluir maior número de doenças. Esta tecnologia permite detectar, com grande sensibilidade, especificidade e rapidez, mais de 30 doenças metabólicas em um mesmo ensaio a partir de um único disco de sangue seco sobre papel de filtro. Para isso é realizada a análise combinada do perfil de aminoácidos e acilcarnitinas sem precisar, geralmente, de sistemas de cromatografia adicionais. O processamento analítico que atualmente è utilizado nos diferentes laboratórios de screening é relativamente homogêneo.
Obesity, adipose tissue and insulin resistance
- Abstract: El tejido adiposo de los sujetos obesos se encuentra infiltrado por una cantidad significativamente superior de macrófagos que en los individuos normopesos. Estos macrófagos posiblemente son atraídos al tejido adiposo debido a la muerte de adipocitos hipertrofiados o por la secreción de citoquinas proinflamatorias. Durante la obesidad, el tejido adiposo secreta grandes cantidades de adipoquinas creando así un ambiente proinflamatorio. Entre las adipoquinas se encuentran el factor de necrosis tumoral alfa y la interleuquina 6 y se producen en mayor cantidad en el tejido adiposo visceral que en el subcutáneo. Estas citoquinas proinflamatorias se encuentran involucradas en la resistencia a la insulina, ya que entre otros mecanismos, interfieren con la ruta de la señalización de la insulina. Durante la obesidad existe un estado de estrés oxidativo caracterizado por elevadas cantidades de especies reactivas de oxígeno, el cual se ha asociado con la resistencia a la insulina y con la diabetes mellitus y adicionalmente permiten perpetuar el ambiente inflamatorio típico de la obesidad, ya que mediante la activación del NF-kB se estimula la expresión de genes que codifican para proteínas y moléculas involucradas en el proceso inflamatorio.The adipose tissue of obese subjects is infiltrated by more macrophages that in normal-weigth subjects. These macrophages are probably attracted to the adipose tissue due to the death of adipocyte hipertrophy or by the secretion of proinflammatory citokynes. During obesity, the adipose tissue releases adipokines like TNF-a and IL-6, promoting a proinflammatory environment. The release of TNF-a and IL-6 is higher in visceral adipose tissue than in subcutaneous adipose tissue. Among the most commonly described adipose tissue inflammatory factors associated with insulin resistance are TNF-a and IL-6, which are positively correlated with adipocyte size. During obesity, the adipose tissue releases adipokines like TNF-a and IL-6, promoting a proinflammatory environment. The release of TNF-a and IL-6 is higher in visceral adipose tissue than in subcutaneous adipose tissue. Among the most commonly described adipose tissue inflammatory factors associated with insulin resistance are TNF-a and IL-6, which are positively correlated with adipocyte size. During obesity, there is a state of oxidative stress with high levels of reactive oxygen species, which has been defined as the link between obesity and insulin resistence which keeps the inflammatory environment due the activation of transcription factor NF-kB, which is involved in induced expression of the cytokine proinflammatory gene.A aplicação da espectrometria de massas em tandem no diagnóstico dos erros inatos do metabolismo O tecido adiposo dos sujeitos obesos se encontra infiltrado por uma quantidade significativamente superior de macrófagos que nos indivíduos normopesos. Estes macrófagos possivelmente sejam atraídos para o tecido adiposo devido à morte de adipócitos hipertrofiados ou pela secreção de citoquinas pró-inflamatórias. Durante a obesidade, o tecido adiposo segrega grandes quantidades de adipocinas criando assim um ambiente pró-inflamatório, dentre as quais se encontram o fator de necrose tumoral alfa e a interleucina 6 e que se produzem em maior quantidade no tecido adiposo visceral que no subcutâneo. Estas citocinas pró-inflamatórias se encontram envolvidas na resistência à insulina, visto que entre outros mecanismos, interferem com o trajeto da sinalização da insulina. Durante a obesidade existe um estado de estresse oxidativo caracterizado por elevadas quantidades de espécies reativas de oxigênio, o qual se tem associado com a resistência à insulina e com a diabetes mellitus e também permitem perpetuar o ambiente inflamatório típico da obesidade, jà que através da ativação do NF-kB se estimula a expressão de genes que codificam para proteínas e moléculas envolvidas no processo inflamatório.
Fundación Bioquímica Argentina Laboratorio de Referencia y Estandarización en Bioquímica Clínica: Estandarización analítica en el Laboratorio Clínico
Heterologous neutralization and interaction of toxic amanitins with Bothrops and Crotalus venoms, and honey bee venom
- Abstract: En el presente trabajo se examinó la interacción de las amanitinas de Amanita phalloides (Basidiomycetes) con los venenos de las serpientes Bothrops neuwiedi diporus ("yarará pequeña"), B. alternatus ("yarará grande"), Crotalus durissus terrificus ("serpiente de cascabel") y de la abeja mielera Apis mellifera. Se aplicaron las técnicas de Ouchterlony, inmunotransferencia, electroforesis rocket y electroforesis en gel de poliacrilamida a los anti-venenos y anti-toxinas obtenidos por inmunización en caballos y/o en conejos. Los antisueros de serpientes y las amanitinas reaccionaron en forma cruzada, así como el veneno de abeja y las amanitinas. Cuando los venenos de Bothrops neuwiedii diporus y Crotalus durissus terrificus se preincubaron con las amanitinas y se analizaron por electroforesis en gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sodio (dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis: SDS-PAGE), algunas bandas de proteínas desaparecieron y otras se redujeron notablemente. Estos resultados revelan por primera vez la interacción y la degradación de las proteínas de los venenos de serpientes por las amanitinas. Por otra parte, la modificación del tiempo de coagulación de la sangre humana, debida a los venenos, se corrigió con los ciclopéptidos de Amanita. Estos resultados también se informan por primera vez en este trabajo. La presencia de polipéptidos tóxicos en los venenos de serpientes y abejas, así como en A. phalloides y la reactividad cruzada demostradas en este trabajo, sugieren la existencia de epítopos comunes a todos ellos. Teniendo en cuenta estas reacciones, el uso de anti-venenos heterólogos parece ser de utilidad en el tratamiento del envenenamiento.In the present work, the interaction of the amanitins of Amanita phalloides (Basidiomycetes) with the venoms of Bothrops neuwiedi diporus ("small yarará snake"), B. alternatus ("big yarará"), Crotalus durissus terrificus ("rattlesnake"), and honey bee Apis mellifera was examined. Ouchterlony, immunotransfer, rocket-electrophoresis, and polyacrylamide gel electrophoresis techniques were applied to anti-venoms and anti-toxins obtained by immunization in horses and/or in rabbits. Snake antisera and amanitins cross-reacted as well as bee venom and amanitins. When venoms of Bothrops neuwiedii diporus and Crotalus durissus terrificus were preincubated with amanitins and analysed by sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), some protein bands disappeared and others were significantly reduced. These results reveal for the first time the interaction and degradation of proteins in snake venoms by amanitins. Moreover, the modification of the human blood clotting time due to snake venoms was corrected by the Amanita cyclopeptides. These results are also reported for the first time in this work. The occurrence of toxic polypeptides in the snake and bee venoms as well as in A. phalloides, and the cross-reactivity demostrated herein, suggest the occurrence of epitopes common to all of them. Taking into account these reactions,the use of heterologous anti-venoms seems to be of value in envenomation treatment.No presente trabalho foi examinada a interação das amanitinas de Amanita phalloides (Basidiomycetes) com os venenos das serpentes Bothrops neuwiedi diporus ("jararaca-cruzeira"), B. alternatus ("urutu"), Crotalus durissus terrificus ("serpente cascavel") e da abelha-europeia Apis mellifera. Foram aplicadas as técnicas de Ouchterlony, imunotransferência, eletroforese rocket e eletroforese em gel de poliacrilamida aos anti-venenos e anti-toxinas obtidos por imunização em cavalos e/ou em coelhos. Os anti-soros de serpentes e as amanitinas reagiram em forma cruzada, bem como o veneno de abelha e as amanitinas. Quando os venenos de Bothrops neuwiedii diporus e Crotalus durissus terrificus foram incubados previamente com as amanitinas e foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecilsulfato de sódio (dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis: SDS-PAGE), algumas faixas de proteínas desapareceram e outras se reduziram notavelmente. Estes resultados revelam por primeira vez a interação e a degradação das proteínas dos venenos de serpentes pelas amanitinas. Por outra parte, a modificação do tempo de coagulação do sangue humano, devido aos venenos, se corrigiu com os ciclopeptídeos de Amanita. Estes resultados também se informam por primeira vez neste trabalho. A presença de polipeptídeos tóxicos nos venenos de serpentes e abelhas, bem como em A. phalloides e a reatividade cruzada demonstradas neste trabalho, sugerem a existência de epítopos comuns a todos eles. Levando em consideração estas reações, o uso de anti-venenos heterólogos parece ser de utilidade no tratamento do envenenamento.
CG-rich genes amplified with the formamide, bovine seric albumin y dimethylsulfoxide mix
- Abstract: Diversos aditivos químicos han sido utilizados para garantizar la polimerización de genes con islas CpG. El objetivo de este trabajo fue diseñar una mezcla potenciadora de PCR para amplificar genes con islas CpG. Con ese fin se analizaron fragmentos de los genes IRS2 y HNF1a con el programa EMBOSS CpG Report. Los iniciadores se diseñaron con el programa Primer 3 y se analizaron con el programa e-PCR. Se usaron tres aditivos químicos: Albúmina sérica bovina (0,1µg/µL), dimetilsulfóxido (5%) y formamida (5%) para 5 ensayos de PCR: dos usando un solo aditivo, dos combinando dos aditivos y uno combinando tres aditivos. Las amplificaciones con las mezclas se realizaron con las enzimas Taq Nativa, taq Recombinante y Taq Platinum. La calidad de los amplicones se probó por secuenciación. Fragmentos sin islas CpG (HNF-1a) amplificaron con las tres enzimas, sin el uso de los aditivos pero presentaron problemas de pureza en la secuenciación. Los fragmentos del gen IRS2 con islas CpG amplificaron sólo con la combinación de tres aditivos dimetilsulfóxido, albúmina sérica bovina y formamida, independientemente de la enzima usada, las secuencias fueron limpias. Se concluye que la mezcla de tres aditivos es una solución que permite obtener amplicones de alta calidad en genes con islas CpG, con cromatogramas limpios en la secuenciación.Several chemical additives have been used to assure polymerization in CpG islands.The aim of the present work was to design a PCR enhancer mixture in order to amplify GC-rich genes. Fragments of IRS2 and HNF1a genes were analyzed using EMBOSS CpG Report Software. Primers were designed with the Primer3 Software and were tested with ePCR Software. Three additives were used: BSA (0.1µg/µL), DMSO (5%) and formamide (5%), in five PCR assays, two using one additive, two combining two additives and one with all additives. DNA sequences were amplified with the following enzymes: Native Taq, recombinant Taq and platinum Taq DNA polymerase. Amplicon quality was examined by sequencing. HNF1a gene was amplified without additives; however, the sequences were not amplified and showed purity problems in sequencing. The gene fragments IRS2 with CpG islands were amplified with additives DMSO, BSA and Formamida mixture, notwithstanding the enzyme used. These sequences were clean. DMSO-BSA-Formamide mixture can be a solution to obtain GC-rich DNA amplicons with such a high quality that it generates neat chromatograms during sequencing.Diversos aditivos químicos têm sido utilizados para garantir a polimerização de genes com ilhas CpG. O objetivo do trabalho foi desenhar uma mistura que potencie PCR para amplificar genes com ilhas CpG. Para esta finalidade foram analisados fragmentos dos genes IRS2 e HNF1a com o programa EMBOSS CpG Report. Os iniciadores foram desenhados com o programa Primer 3 e se analisaram com o programa e-PCR. Foram utilizados três aditivos químicos: Albumina sérica bovina (0,1µg/µlL, Dimetilsulfóxido (5%) e formamida (5%) para 5 ensaios de PCR: dois usando um único aditivo, dois combinando dois aditivos e um combinando três aditivos. As amplificações com as misturas se realizaram com as enzimas, Taq Nativa, taq Recombinante e Taq Platinum. A qualidade das ampliações foi provada por sequenciação. Fragmentos sem ilhas CpG (HNF-1a) amplificaram com as três enzimas, sem o uso dos aditivos porém apresentaram problemas de pureza na sequenciação. Os fragmentos do gene IRS2 com ilhas CpG amplificaram apenas com a combinação de três aditivos dimetilsulfóxido, albumina sérica bovina e formamida, independentemente da enzima usada, as sequências foram limpas. A conclusão que a mistura de três aditivos é uma solução que permite obter ampliações de alta qualidade em genes com ilhas CpG, com cromatogramas limpos na secuenciação.
Genotypic characterization of prevalent methicillin resistant Staphylococcus aureus in Pakistani community hospitals
- Abstract: El gen de la proteína A se usó como marcador genético para la caracterización de aislados de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina (SAMR). De un total de 130 aislados de Staphylococcus aureus, 90 fueron identificados como SAMR y 81 de éstos se pudieron caracterizar por tipificación spa. Todos estos aislados fueron obtenidos de cinco Hospitales Nacionales de la Comunidad. Se utilizaron dos juegos diferentes de cebadores para amplificar la región-X del gen de la proteína A en las cepas de SAMR. Un conjunto de cebadores, spa-F/spa-R ha identificado tres tipos de repeticiones diferentes, a saber, 7 repeticiones (spa 2), 8 repeticiones (spa 3) y 10 repeticiones (spa 4) y otro conjunto de cebadores, spa-1113F/spa-1514R ha identificado 4 tipos de repeticiones diferentes, a saber, 6 repeticiones (spa 1), 15 repeticiones (spa 6), y 17 repeticiones (spa 7) y 19 repeticiones (spa 8). Se identificó la repetición 11 (spa 5) con ambos conjuntos de cebadores. Los tipos de SAMR esporádicos que portaban las repeticiones 6, 7, 10, 17 y 19 fueron poco prevalentes mientras que los SAMR epidémicos con 8, 11, y 15 repeticiones fueron más prevalentes y se los consideró involucrados en la transmisión entre los pacientes dentro de los diferentes hospitales. Este trabajo concluye que la técnica spa es lo suficientemente eficiente como para diferenciar las cepas epidémicas, esporádicas y aquéllas que se transforman lentamente de esporádicas a epidémicas.Protein A gene was used as a genetic marker for the characterization of Pakistani methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates. Out of a total of 130 Staphylococcus aureus isolates, 90 were identified as MRSA and of these 90 MRSA, 81 MRSA isolates were characterized by spa typing. All of these isolates were collected from five National Community Hospitals. Two different sets of primers were used to amplify the X-region of Protein A gene in MRSA strains. One set of primers i.e, spa-F/spa-R identified three types of different repeats viz., 7 repeats (spa 2), 8 repeats (spa 3) and 10 repeats (spa 4) and another set of primers i.e. spa-1113F/spa-1514R identified 4 types of different repeats viz., 6 repeats (spa 1), 15 repeats (spa 6), and 17 repeats (spa 7) and 19 repeats (spa 8). Repeat 11 (spa 5) was identified with both sets of primers. Sporadic MRSA types carrying 6, 7, 10, 17 and 19 repeats were less prevalent, while the epidemic MRSA with 8, 11 and 15 repeats were more prevalent and considered to be involved in transmission among the patients within different hospitals. Research work concludes that spa technique is efficient enough to differentiate spa strains carrying variations in general and those slowly transforming from sporadic to epidemic outbreak in particular.O gene da proteína A foi usado como marcador genético para a caracterização de isolados de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (SAMR). De um total de 130 isolados de Staphylococcus aureus, 90 foram identificados como SAMR e 81 destes puderam se caracterizar por tipificação spa. Todos estes isolados foram obtidos de cinco Hospitais Nacionais da Comunidade. Utilizaram-se dois jogos diferentes de cevadores para amplificar a região-X do gene da proteína A nas cepas de SAMRUn conjunto de cevadores, spa-F/spa-R tem identificado três tipos de repetições diferentes, a saber, 7 repetições (spa 2), 8 repetições (spa 3) e 10 repetições (spa 4) e outro conjunto de cevadores, spa-1113F/spa-1514R tem identificado 4 tipos de repetições diferentes, a saber, 6 repetições (spa 1), 15 repetições (spa 6), e 17 repetições (spa 7) e 19 repetições (spa 8). Foi identificada a repetição 11 (spa 5) com ambos os conjuntos de cevadores. Os tipos de SAMR esporádicos que tinham as repetições 6, 7, 10, 17 e 19 foram pouco prevalecentes enquanto que os SAMR epidêmicos com 8, 11, e 15 repetições foram mais prevalecentes e são considerados envolvidos na transmissão entre os pacientes dentro dos diferentes hospitais. Este trabalho conclui que a técnica spa é o suficientemente eficiente como para diferenciar as cepas epidêmicas, esporádicas e aquelas que se transformam lentamente de esporádicas em epidêmicas.
THE NATIONAL ACADEMY OF CLINICAL BIOCHEMISTRY: Guías y recomendaciones para el diagnóstico y manejo de la Diabetes Mellitus
- Abstract: Background: Measuring circulating cardiac troponin using novel sensitive assays has revealed that even minute elevations are associated with increased mortality in patients with coronary artery disease or even in the general population. Less well defined, however, is the incremental value of measuring circulating cardiac troponin I (cTnI) by a sensitive assay for risk assessment in primary prevention. Methods: We measured circulating concentrations of cTnI, N-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP), and high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) in 5388 individuals free of known cardiovascular disease recruited into the DETECT study, a prospective longitudinal population-based cohort study. We determined the prognostic implications for incident major adverse cardiovascular events (MACE) during 5 years of follow-up. Results: Circulating cTnI was detectable in 19% of the subjects. Increased cTnI concentrations were associated with established risk factors for atherosclerosis and demonstrated a graded relationship with all-cause mortality and incident MACE during 5-year follow-up. A single measurement of cTnI significantly improved risk prediction over established risk factors, and also added prognostic information, when adjusted for serum concentrations of NT-proBNP and hsCRP. Conclusions: Minute increases in cTnI are associated with increased mortality and incident MACE in a large primary prevention cohort and, thus, identify contributors to cardiovascular risk not fully captured by traditional risk factor assessment.Antecedentes: La medición de troponina cardíaca en circulación mediante nuevos ensayos sensibles ha revelado que incluso mínimas elevaciones se asocian con mayor mortalidad en pacientes con enfermedad arterial coronaria, o incluso en la población general. Sin embargo, menos conocido es el valor incremental o agregado de la medición de la troponina I cardiaca (cTnI) circulante mediante un ensayo sensible para la evaluación del riesgo en prevención primaria. Métodos: Se midieron las concentraciones circulantes de cTnI, de pro- péptido natriurético tipo B N-terminal (NT-proBNP), y de proteína C reactiva de alta sensibilidad (PCRus), en 5388 personas sin enfermedad cardiovascular conocida reclutadas en el estudio DETECT, un estudio prospectivo longitudinal de cohorte de base poblacional. Se determinaron las implicancias pronósticas en la incidencia de eventos adversos cardiovasculares mayores (MACE) durante 5 años de seguimiento. Resultados: La cTnI se detectó en el 19% de los sujetos. El aumento de las concentraciones de cTnI se asoció con factores de riesgo establecidos para la aterosclerosis y demostró una relación gradual con la mortalidad por todas las causas y la incidencia de MACE durante los 5 años de seguimiento. Una sola medición de cTnI mejoró significativamente la predicción del riesgo por encima de los factores de riesgo establecidos, y también agregó información pronóstica cuando se ajustó por la concentración sérica de NT-proBNP y PCRus. Conclusiones: Mínimos incrementos de cTnI se asociaron con mayor mortalidad e incidencia de MACE en una gran cohorte de prevención primaria y, por tanto, la identificación de sujetos con riesgo cardiovascular no siempre son detectados completamente por la evaluación de factores de riesgo tradicionales.
Circulating troponin as measured by a sensitive assay for cardiovascular risk assessment in primary prevention
- Abstract: Background: Measuring circulating cardiac troponin using novel sensitive assays has revealed that even minute elevations are associated with increased mortality in patients with coronary artery disease or even in the general population. Less well defined, however, is the incremental value of measuring circulating cardiac troponin I (cTnI) by a sensitive assay for risk assessment in primary prevention. Methods: We measured circulating concentrations of cTnI, N-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP), and high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) in 5388 individuals free of known cardiovascular disease recruited into the DETECT study, a prospective longitudinal population-based cohort study. We determined the prognostic implications for incident major adverse cardiovascular events (MACE) during 5 years of follow-up. Results: Circulating cTnI was detectable in 19% of the subjects. Increased cTnI concentrations were associated with established risk factors for atherosclerosis and demonstrated a graded relationship with all-cause mortality and incident MACE during 5-year follow-up. A single measurement of cTnI significantly improved risk prediction over established risk factors, and also added prognostic information, when adjusted for serum concentrations of NT-proBNP and hsCRP. Conclusions: Minute increases in cTnI are associated with increased mortality and incident MACE in a large primary prevention cohort and, thus, identify contributors to cardiovascular risk not fully captured by traditional risk factor assessment.Antecedentes: La medición de troponina cardíaca en circulación mediante nuevos ensayos sensibles ha revelado que incluso mínimas elevaciones se asocian con mayor mortalidad en pacientes con enfermedad arterial coronaria, o incluso en la población general. Sin embargo, menos conocido es el valor incremental o agregado de la medición de la troponina I cardiaca (cTnI) circulante mediante un ensayo sensible para la evaluación del riesgo en prevención primaria. Métodos: Se midieron las concentraciones circulantes de cTnI, de pro- péptido natriurético tipo B N-terminal (NT-proBNP), y de proteína C reactiva de alta sensibilidad (PCRus), en 5388 personas sin enfermedad cardiovascular conocida reclutadas en el estudio DETECT, un estudio prospectivo longitudinal de cohorte de base poblacional. Se determinaron las implicancias pronósticas en la incidencia de eventos adversos cardiovasculares mayores (MACE) durante 5 años de seguimiento. Resultados: La cTnI se detectó en el 19% de los sujetos. El aumento de las concentraciones de cTnI se asoció con factores de riesgo establecidos para la aterosclerosis y demostró una relación gradual con la mortalidad por todas las causas y la incidencia de MACE durante los 5 años de seguimiento. Una sola medición de cTnI mejoró significativamente la predicción del riesgo por encima de los factores de riesgo establecidos, y también agregó información pronóstica cuando se ajustó por la concentración sérica de NT-proBNP y PCRus. Conclusiones: Mínimos incrementos de cTnI se asociaron con mayor mortalidad e incidencia de MACE en una gran cohorte de prevención primaria y, por tanto, la identificación de sujetos con riesgo cardiovascular no siempre son detectados completamente por la evaluación de factores de riesgo tradicionales.