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Revista de Microbiologia
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ISSN (Online) 0001-3714
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  • Microrganismos extremotermofílicos e suas enzimas
           despolimerizantes

    • Abstract: Thermophilic and hyperthermophilic microorganisms are found as normal inhabitants of continental and submarine volcanic areas, geothermally heated sea-sediments and hydrothermal vents and thus are considered extremophiles. Several present or potential applications of extremophilic enzymes are reviewed, especially polymer-hydrolysing enzymes, such as amylolytic and hemicellulolytic enzymes. The purpose of this review is to present the range of morphological and metabolic features among those microorganisms growing from 70oC to 100°C and to indicate potential opportunities for useful applications derived from these features.Microrganismos termofílicos e hipertermofílicos são encontrados como habitantes normais de áreas vulcânicas continentais e submarinas, sedimentos marinhos com aquecimento geotermal e ventos hidrotermais; portanto, são considerados extremofílicos. Diversas aplicações presentes ou potenciais de enzimas de extremofílicos são revisadas, especialmente enzimas que hidrolizam polímeros, tais como amilases e hemicelulases. São também apresentadas as variações das características morfológicas e metabólicas entre estes organismos que crescem entre 70oC e 100°C e indicadas as oportunidades potenciais de aplicações derivadas destas características.
       
  • Seleção de linhagens bacterianas para atividade pectinolítica:
           caracterização das poligalacturonases produzidas por Bacillus sp

    • Abstract: One hundred sixty eight bacterial strains, isolated from soil and samples of vegetable in decomposition, were screened for the use of citrus pectin as the sole carbon source. 102 were positive for pectinase depolymerization in assay plates as evidenced by clear hydrolization halos. Among them, 30% presented considerable pectinolytic activity. The cultivation of these strains by submerged and semi-solid fermentation for polygalacturonase production indicated that five strains of Bacillus sp produced high quantities of the enzyme. The physico-chemical characteristics, such as optimum pH of 6.0 - 7.0, optimum temperatures between 45oC and 55oC, stability at temperatures above 40oC and in neutral and alkaline pH, were determined.A partir de amostras de solo e de material vegetal em decomposição, foram isoladas 168 linhagens bacterianas capazes de utilizar pectina de citrus como única fonte de carbono. Destas, 102 foram positivas para a despolimerização da pectina, através de ensaios em placa de Petri nos quais foram detectados halos claros ao redor das colônias. Entre essas, 30% (50) foram consideradas ótimas ou boas produtoras de poligalacturonase. O cultivo dessas linhagens através de fermentação submersa e semi-sólida para a quantificação das poligalacturonases (PG) produzidas indicou que 6 linhagens de Bacillus sp foram as melhores produtoras da enzima. As características físico-químicas, como pH ótimos entre 6,0 e 7,0 e temperaturas ótimas entre 45 e 55oC, estabilidade à temperaturas acima de 40oC e a pH neutros e alcalinos foram determinadas.
       
  • Produção de lipase extracelular pelo fungo fitopatogênico Fusarium
           solani FS1

    • Abstract: A Brazilian strain of Fusarium solani was tested for extracellular lipase production in peptone-olive oil medium. The fungus produced 10,500 U.l-1 of lipase after 72 hours of cultivation at 25oC in shake-flask at 120 rpm in a medium containing 3% (w/v) peptone plus 0.5% (v/v) olive oil. Glucose (1% w/v) was found to inhibit the inductive effect of olive oil. Peptone concentrations below 3% (w/v) resulted in a reduced lipase production while increased olive oil concentration (above 0.5%) did not further stimulate lipase production. The optimum lipase activity was achieved at pH 8.6 and 30oC and a good enzyme stability (80% activity retention) was observed at pH ranging from 7.6 to 8.6, and the activity rapidly dropped at temperatures above 50oC. Lipase activity was stimulated by the addition of n-hexane to the culture medium supernatants, in contrast to incubation with water-soluble solvents.
       
  • Crescimento e atividade de endoglicanase de Acetivibrio cellulolyticus
           cultivado em três diferentes substratos celulósicos

    • Abstract: The growth kinetics of Acetivibrio cellulolyticus grown in medium containing different carbon sources (cellobiose, amorphous or crystalline cellulose) was investigated. The specific growth rate was higher in cellobiose fed cultures than in the presence of the other two substrates. Endoglucanase production was greater in cultures grown on amorphous cellulose; enzyme activity increased during the stationary phase in cultures grown on crystalline cellulose.O estudo da cinética de crescimento de Acetivibrio cellulolyticus cultivado em três diferentes substratos celulósicos (celulose amorfa, celulose cristalina e celobiose) revelou que em celobiose, a velocidade específica de crescimento foi maior que nos dois tipos de celulose. A atividade de endoglicanase foi maior em celulose amorfa; em celulose cristalina a atividade enzimática, aumentou durante a fase estacionária.
       
  • Algumas propriedades enzimáticas da colesterol oxidase produzida por
           Brevibacterium sp.

    • Abstract: In this study we determined some properties of the cholesterol oxidase from a Brevibacterium strain isolated from buffalo's milk and identified the cholesterol degradation products by the bacterial cell. A small fraction of the enzyme synthesized by cells cultured in liquid medium for 7days was released into the medium whereas a larger fraction remained bound to the cell membrane. The extraction of this fraction was efficiently accomplished in 1 mM phosphate buffer, pH 7.0, containing 0.7% Triton X-100. The enzyme stability under freezing and at 45oC was improved by addition of 20% glycerol. The optimum temperature and pH for the enzyme activity were 53°C and 7.5, respectively. The only steroidal product from cholesterol oxidation by the microbial cell and by the crude extract of the membrane-bound enzyme was 4-colesten-3-one. Chromatographic analysis showed that minor no steroidal compounds as well as 4-colesten-3-one found in the reaction media arose during fermentation process and were extracted together with the enzyme in the buffer solution. Cholesterol oxidation by the membrane-bound enzyme was a first order reaction type.Neste trabalho foram definidas algumas propriedades da enzima colesterol oxidase produzida por uma linhagem de Brevibacterium sp. isolada de leite de búfala e foram identificados os compostos resultantes da degradação do colesterol pela bactéria. Uma pequena fração da enzima sintetizada pelas células cultivadas em meio líquido por 7 dias foi liberada no meio de cultura e uma fração maior permaneceu ligada à membrana celular. A extração desta fração foi eficientemente efetuada em tampão fosfato 1mM, pH 7,0, contendo 0,7% de triton X-100. A estabilidade da enzima congelada e a 45oC foi aumentada pela adição de 20% de glicerol. A temperatura ótima para a atividade enzimática esteve ao redor de 53(0)C e o pH ótimo esteve ao redor de 7,5. O único produto da degradação do colesterol, causada pela ação da célula bacteriana e pela colesterol oxidase ligada à membrana, acumulado no meio de cultura foi o 4-colesteno-3-ona. Análise cromatográfica revelou que uma pequena quantidade de compostos não esteroídicos, além de 4-colesteno-3-ona, formados durante a fermentação, permanecem aderidos à célula e são extraídos juntamente com a enzima na solução com detergente. A oxidação do colesterol pela enzima bruta ocorreu segundo uma equação de primeira ordem.
       
  • b -galactosidase+de+Kluyveromyces+fragilis+por+partição+por+bioafinidade&rft.title=Revista+de+Microbiologia&rft.issn=0001-3714&rft.date=&rft.volume=">Purificação de b -galactosidase de Kluyveromyces fragilis por
           partição por bioafinidade

    • Abstract: This work investigated the partitioning of b-galactosidase from Kluyveromyces fragilis in aqueous two-phase systems (ATPS) by bioaffinity. PEG 4000 was chemically activated with thresyl chloride, and the biospecific ligand p-aminophenyl 1-thio-b-D-galactopyranoside (APGP) was attached to the activated PEG 4000. A new two-step method for extraction and purification of the enzyme b-galactosidase from Kluyveromyces fragilis was developed. In the first step, a system composed of 6% PEG 4000-APGP and 8% dextran 505 was used, where b-galactosidase was strongly partitioned to the top phase (K = 2,330). In the second step, a system formed of 13% PEG-APGP and 9% phosphate salt was used to revert the value of the partition coefficient of b-galactosidase (K = 2 x 10-5) in order to provide the purification and recovery of 39% of the enzyme in the bottom salt-rich phase.Foi desenvolvido um método novo de extração e purificação da ß-galactosidase de Kluyveromyces fragilis em sistema de duas fases aquosas (SDFA). PEG 4000 foi ativado quimicamente com cloreto de tresila e o ligante bioespecífico p-aminofenil-ß-D-tiogalactopiranosídeo (APGP) foi acoplado ao PEG 4000 ativado. Na primeira etapa foi usado um sistema composto de 6% PEG-APGP e 8% dextrana 505, onde a partição da ß-galactosidase ocorreu na fase superior (K = 2.330). Na segunda etapa foi usado um sistema composto por 13% PEG-APGP e 9% fosfato para reverter o valor do coeficiente de partição da ß-galactosidase (K = 2,2 x 10-5), obtendo-se recuperação de 39% da enzima na fase salina.
       
  • Produção de substâncias inibidoras semelhantes à bacteriocina por
           cepas de Streptococcus salivarius, isoladas da língua e garganta de
           crianças com e sem dor de garganta

    • Abstract: Streptococcus salivarius strains, isolated from children with and without sore throat, were tested for bacteriocin production against Streptococcus pyogenes. S. salivarius strains producing bacteriocin-like inhibitory substances (BLIS) against S. pyogenes were more frequently found in children without sore throat. These results suggest that these children may be protected against sore throat by the presence of BLIS-positive S. salivarius strains.Cepas de Streptococcus salivarius, isoladas de crianças com e sem dor de garganta, foram testadas quanto à produção de bacteriocina contra Streptococcus pyogenes. Os resultados mostraram que as crianças que não tinham dor de garganta possuiam, na boca, cepas de bactérias produtoras de substâncias inibidoras semelhantes à bacteriocina contra S. pyogenes.
       
  • Candida sp na cavidade bucal com e sem lesão: diluição inibitória
           máxima de Própolis e Periogard

    • Abstract: Fifty individuals of both sexes aged on average 45.2 years were evaluated at the Semiology Clinic of FORP-USP in order to isolate and identify yeasts from the oral cavity, with and without lesions, and to determine the maximal inhibitory dilution (MID) of the commercial products Propolis (Apis-Flora) and Periogard (Colgate) against the strains isolated. Yeasts of the genus Candida were detected in the saliva of 9/19 (47.4%) individuals with a clinically healthy mouth, 18/22 (81.8%) of individuals with oral lesions, and in 4/9 (44.4%) of patients with deviation from normality, and were detected in 19/22 (86.4%) of the lesions. In the group with oral candidiasis, we isolated in tongue and lesion, respectively for each specie: C.tropicalis (8% and 10.7%), C.glabrata (4% and 3.6%) and C.parapsilosis (2% and 3.6%), in addition to C.albicans (71.4% and 67.8%) as the only species and the prevalent. The total cfu counts/ml saliva showed a higher mean value in the group with oral candidiasis (171.5% x 10(3)) than in the control group (72.6 x 10(3)) or the group with abnormalities (8.3 x 10(3)). Most of the test strains 67/70 (95.71%) were sensitive to the antiseptics, with Propolis presenting a MID of 1:20 for 54/70/77.1%), and Periogard a MID of 1:160 for 42/70 (60%) strains from healthy sites, results similar to those obtained with strains from oral lesions. Different results were mainly observed among different species. The results indicate the possibility of using the antiseptics Propolis and Periogard (chlorhexidine) for the prevention and treatment of oral candidiasis.Foram avaliados 50 indivíduos, de ambos os sexos e faixa etária média de 42,5 anos, da clínica de Semiologia da FORP-USP, objetivando-se isolar e identificar leveduras na cavidade bucal, com e sem lesão, e determinar a DIM dos produtos comerciais Própolis (Apis-Flora) e Periogard (Colgate) frente às cepas isoladas. Leveduras do gênero Candida foram detectadas na saliva de 9(47,4%) indivíduos com boca clinicamente sadia, 18/81,8% portadores de lesões bucais e de 4/44,4% pacientes com desvio de normalidade; sendo detectadas em 19/86,4% lesões. No grupo com candidose bucal, respectivamente de língua e lesão, isolou-se C.tropicalis (8% e 10,7%), C.glabrata 4% e 3,6%) e C.parapsilosis (2% e 3,6%), além de C.albicans (71,4% e 67,8%) como espécie única e prevalente. A contagem de ufc total/ml de saliva demonstrou um valor médio no grupo com candidose bucal (171,5% x 10(3)) maior do que no controle (72,6 x 10(3)) e portadores de anormalidade (8,3 x 10(3)). A maioria das cepas testes 67/70 (95,7%) foi sensível aos anti-sépticos, sendo que a Própolis apresentou uma DIM igual a 1:20 para 54/70 (77,1%) e, o Periogard uma DIM de 1:160 para 42/70 (60%) cepas de nichos sadios; semelhante ao obtido com cepas de lesões bucais. Resultados diferentes ocorreram, principalmente, entre espécies diferentes. Os resultados indicam a possibilidade de se empregar os anti-sépticos Própolis e Periogard (clorexidina), na prevenção e na terapêutica da candidose bucal.
       
  • Atividade semelhante a bacteriocina de Fusobacterium nucleatum orais
           isolados de primatas humanos e não-humanos

    • Abstract: Fusobacterium nucleatum is indigenous of the human oral cavity and has been involved in different infectious processes. The production of bacteriocin-like substances may be important in regulation of bacterial microbiota in oral cavity. The ability to produce bacteriocin-like substances by 80 oral F. nucleatum isolates obtained from periodontal patients, healthy individuals and Cebus apella monkeys, was examinated. 17.5% of all tested isolates showed auto-antagonism and 78.8% iso- or hetero-antagonism. No isolate from monkey was capable to produce auto-inhibition. In this study, the antagonistic substances production was variable in all tested isolates. Most of the F. nucleatum showed antagonistic activity against tested reference strains. These data suggest a possible participation of these substances on the oral microbial ecology in humans and animals. However, the role of bacteriocins in regulating dental plaque microbiota in vivo is discussed.Fusobacterium nucleatum é indígena da cavidade oral humana e tem sido envolvido em diferentes processos infecciosos. A produção de substâncias semelhantes a bacteriocinas pode ser importante na regulação da microbiota bacteriana da cavidade oral. A capacidade de produzir substâncias tipo bacteriocina de 80 isolados de F. nucleatum orais, obtidos de pacientes com doença periodontal, indivíduos sadios e macaco Cebus apella, foi avaliada. 17,5% de todos os isolados mostrou auto-antagonismo e 78,8% iso- ou hetero-antagonismo. Nenhum isolado de macaco foi capaz de produzir auto-inibição. Neste estudo, a produção de substâncias antagonístas foi variável em todos os isolados testados. A maioria dos F. nucleatum mostrou atividade antagonísta para as cepas de referência testadas. Esses dados sugerem a possível participação dessas substâncias sobre a ecologia microbiana em humanos e animais. Entretanto, o papel das bacteriocinas na regulação da microbiota da placa dental in vivo é discutida.
       
  • Pontos críticos de controle na preparação de almôndegas e kibes em uma
           cozinha hospitalar

    • Abstract: Hazards and critical control points (CCP) associated with meat balls and kibbe preparations in a hospital kitchen were determined using flow diagrams and microbiological testing of samples collected along the production line. Microbiological testing included counts of mesophilic and psicrothrophic microorganisms, yeasts and molds, total and fecal coliforms, C. perfringens, coagulase positive staphylococci, bacteria of the B. cereus group and detection of Salmonella. Time/temperature binomial was measured in all steps of preparation. A decision tree was used to help in the determination of CCPs. The detected hazards were: contamination of raw meat and vegetables, multiplication of the microorganisms during meat manipulation, poor hygiene of utensils and equipment, and survival of microorganisms to the cooking process. Cooking and hot-holding were considered CCPs. The results stress the importance of the implementation of a training program for nutricionists and foodhandlers and the monitoring of CCPs and other measures to prevent foodborne diseases.Foram determinados os perigos e os pontos críticos de controle (PCC) associados a preparações de almôndegas e kibes em uma cozinha hospitalar, baseados em fluxogramas de preparo e análises microbiológicas de amostras coletadas ao longo da preparação. As análises microbiológicas incluíram a contagem de microrganismos mesófilos, psicrotróficos, bolores e leveduras, C. perfringens, estafilococos coagulase positiva, bactérias do grupo B. cereus, número mais provável de coliformes totais e fecais e pesquisa de Salmonella. Foram medidos o tempo e a temperatura em todas as etapas da preparação. Para a determinação dos PCCs foi utilizada uma árvore decisória. Foram detectados os seguintes perigos: a contaminação da carne e vegetais crus, a multiplicação dos microrganismos durante a etapa de manipulação da carne, a falta de higiene dos utensílios equipamentos, a sobrevivência de microrganismos ao processo de cocção. A cocção e a manutenção à quente foram considerados PCCs. Os resultados indicam a importância da implantação de um programa de treinamento de nutricionistas e cozinheiros e de um sistema de monitoramento dos PCCs, assim como de medidas para a prevenção de doenças de origem alimentar.
       
  • Caracterização molecular de Listeria monocytogenes
           isolada de alimentos

    • Abstract: A total of 30 strains of Listeria monocytogenes isolated from different foods (16 of differents kinds of sausage, 14 cheese,) purchased at groceries of São Paulo City were ribotyped and analysed for the presence and expression of hemolysin gene and production of phosphatidylinositol-specific phosphalipase C - PI-PLC enzyme. The L. monocytogenes strains were differentiated into six ribotype classes. A total of 13 (43.3%) from these strains belong to the same ribotype (ribotype I), and was coincident to the ribotype of the standard L. monocytogenes prototype strain (ATCC-15313). The hemolytic activity was observed in 29 (96.7%) strains when incubated at 37oC, but not at 4oC. The direct colony hybridization method for hemolysin gene detection showed a positive reaction whit all the 30 L. monocytogenes strains, while showed negative reaction with other Listeria spp. The PI-PLC was produced by 27 (90%) of the strains analysed. There was no correlation between the six identified ribotypes and the virulence factors (hemolysin and PI-PLC) studied.Foram estudadas 30 cepas de Listeria monocytogenes isoladas a partir de diferentes alimentos (16 diferentes tipos de linguiça, 14 de queijo), adquiridos em supermercados da cidade de São Paulo. As cepas foram classificadas através da ribotipagem e analisadas quanto à presença e expressão do gene da hemolisina e à produção da enzima fosfolipase C fosfatidilinositol-específica PI-PLC. As cepas de L. monocytogenes foram diferenciadas em 6 ribotipos. As cepas do tipo I possuiam o mesmo perfil da amostra padrão de L.monocytogenes (ATCC 15313), sendo 13 (43,3%) das cepas estudadas correspondentes a ele. A atividade hemolítica foi observada em 29 (96,7%) das cepas, quando incubadas a 37°C em agar sangue, mas não a 4°C. O método da hibridização direta de colônias, utilizando sonda para hemolisina, revelou resultado positivo para todas as cepas. A PI-PLC foi produzida por 90% das amostras analisadas. Deste modo, foi possível concluir que não há relação entre os seis ribotipos de L. monocytogenes identificados nesse estudo e os fatores de virulência estudados (hemolisina e PI-PLC).
       
  • Ocorrência de Listeria monocytogenes em salame

    • Abstract: Eighty-one samples of four different types of salami (Friolan, Hamburguese, Italian and Milanese), belonging to five brands, and purchased at Rio de Janeiro market, were evaluated for the occurrence of Listeria monocytogenes. The pathogen was detected in 13.3% of Italian type samples of salami, while L. innocua occurred in 6.5% of the Italian type and in 16.6% of the Milanese type. The remaining samples were negative for Listeria spp.A ocorrência de Listeria monocytogenes foi avaliada em oitenta e uma amostras de quatro diferentes tipos de salame fermentados ( Friolano, Hamburguês, Italiano e Milano ), pertencentes a cinco marcas comerciais, adquiridas no mercado varejista da cidade do Rio de Janeiro. L. monocytogenes foi detectada em 13,3% das amostras de salame do tipo Italiano, enquanto que L. innocua ocorreu em 6,7% das mostras do tipo Italiano e 16,6% das amostras do tipo Milano. As demais amostras foram negativas para Listeria spp.
       
  • Caracterização de amostras de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC)
           típicas e atípicas do sorogrupo O55 através da análise por RAPD

    • Abstract: The genetic diversity of 41 typical and atypical enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) strains of the serogroup O55 was analyzed by using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) method. All typical EPEC O55 strains were grouped in two clusters (A and C) and belonged to the serotype O55:H6, while cluster B included all atypical strains, which were of the serotype O55:H7. The three groups also included non-motile strains. RAPD may be a useful method for epidemiological studies on E. coli O55 infection.Quarenta e uma amostras de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) típicas e atípicas do sorogrupo O55 foram analisadas com relação à diversidade genética através da técnica de RAPD (random amplified polymorphic DNA). Todas amostras de EPEC O55 típicas ficaram localizadas em 2 grupos (A e C) e pertenciam ao sorotipo O55:H6, enquanto que o grupo B compreendia todas as amostras atípicas, as quais eram do sorotipo O55:H7. Os três grupos apresentavam também amostras imóveis. A técnica de RAPD pode ser uma ferramenta de grande utilidade em estudos epidemiológicos da infecção pela E. coli O55.
       
  • Um estudo experimental da bacterivoria por nanoflagelados

    • Abstract: Heterotrophic nanoflagellate Pseudobodo tremulans (4.8 to 7.0 µm) and heterotrophic bacteria, isolated from coastal waters in Ubatuba, SP, Brazil, were used in experiments to analyze quantitatively the relationships between bacteria and nanoflagellates. The meaning of these results for the role of heterotrophic nanoflagellates in the Ubatuba coastal ecosystem is discussed.O nanoflagelado heterotrófico de dimensões entre 4,8 e 7,0 µm (Pseudobodo tremulans) e uma bactéria heterotrófica, isolados das águas costeiras de Ubatuba, SP, Brasil, foram utilizados em experimentos com o objetivo de analisar quantitativamente as relações entre bactérias e nanoflagelados. O significado dos resultados obtidos em relação ao papel dos nanoflagelados heterotróficos no ecossistema costeiro de Ubatuba é discutido.
       
  • Suscetibilidade de linhagens celulares a vírus aviários

    • Abstract: The susceptibility of the five cell lines - IB-RS-2, RK-13, Vero, BHK-21, CER - to reovirus S1133 and infectious bursal disease virus (IBDV vaccine GBV-8 strain) was studied to better define satisfactory and sensitive cell culture systems. Cultures were compared for presence of CPE, virus titers and detection of viral RNA. CPE and viral RNA were detected in CER and BHK-21 cells after reovirus inoculation and in RK-13 cell line after IBDV inoculation and with high virus titers. Virus replication by production of low virus titers occurred in IB-RS-2 and Vero cells with reovirus and in BHK-21 cell line with IBDV.Estudou-se a suscetibilidade de cinco linhagens celulares (IB-RS-2, RK-13, Vero, BHK-21, CER) ao reovírus S1133 e ao virus vacinal (GBV-8) da doença infecciosa bursal de galinha (IBDV). As culturas foram comparadas quanto a presença de efeito citopático (ECP), título viral e detecção de RNA viral. Nas linhagens CER e BHK-21 detectou-se ECP e RNA viral após inoculação com reovírus e na linhagem RK-13 após inoculação com IBDV, com produção de altos títulos virais. Replicação viral com produção de baixos títulos ocorreu nas linhagens IB-RS-2 e Vero inoculadas com o reovírus e na linhagem BHK-21 com IBDV.
       
  • Características de patogenicidade em amostras de fungos filamentosos
           isolados de aveia processada

    • Abstract: Nineteen strains of filamentous fungi isolated from processed oat were tested for pathogenicity factors, based on three parameters: growth at 37oC, production of phospholipase and urease. Aspergillus niveus, Oidiodendron gryseum and Sporothrix cyanescens were positive for the three parameters. The other species were positive only for one or two of them.Dezenove amostras de fungos filamentosos isoladas de aveia processada foram testadas quanto a fatores de patogenicidade, utilizando-se três parâmetros: crescimento a 37oC, atividades fosfolipásica e ureásica. Sporothrix cianescens, Aspergillus niveus e Oidiodendron gryseum apresentaram características de patogenicidade nos três testes realizados. As demais espécies apresentaram características de patogenicidade somente em um ou dois destes parâmetros.
       
 
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